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开机与系统初始化
- 开启电源：严格按照顺序开启设备电源：总电源 → 显微镜控制箱 → 荧光光源开关（如第3、4号开关） → 计算机
- 软件启动与初始化：启动成像软件。若为当日首次开机，系统可能会自动进行初始化（约30秒），期间请勿放入样品或进行其他操作
- 放置样品：
- 将样品正确放置于载物台。
- 对于载玻片，务必使盖玻片朝下（即朝向物镜）放置。
- 将样本移动到显微镜视野的中央位置。
图像采集参数设置
- 选择观察方式与物镜：
- 软件或显微镜上选择观察模式：BF（明场）或FLUO（荧光，通常为默认）。
- 选择物镜倍数。特别注意：若有两个20倍物镜，用于拍摄载玻片时需选择第二个20倍物镜。
- 切换光路路径，选择通过目镜直接观察或通过软件在电脑屏幕上观察。
- 设置基本成像参数：
- 曝光时间：一般建议控制在20ms以内，以避免信号过曝和荧光淬灭
- Image Size (像素合并)：可设置为2x2以平衡信噪比和分辨率。
- 视场大小：通常调至最大。
- 配置荧光通道：
- 系统通常预设通道，如390nm（DAPI）、475nm（GFP/FITC）、560nm（TRITC/ Cy3）、630nm（Cy5）等。
- 点击"+"号添加所需通道，并为每个通道设置对应的荧光颜色和激发/发射参数。注意区分滤光片本身的参数与软件中通道的设置参数。
- 预览与对焦：
- 点击"动态"预览实时视野。
- 调节动态对比度（Contrast），确保其最大值（Max）不低于3000，以获得良好的信噪比。
- 使用粗调和细调旋钮或软件的自动对焦功能（AF）使图像清晰。对于多通道成像，可启用RFC（实时对焦补偿）模式或在浏览器模式下选择"Live + Single Capture"来确保各通道焦平面一致。
高级成像模式应用
- 选择成像模式：
- Thunder模式：成像速度最快，能有效去除背景噪音，适用于快速活细胞成像。
- 其他模式（如共聚焦模式）：需根据样本类型（如组织厚度、荧光强度）选择。
- 大图拼接
- 拔出显微镜右侧的杆子，进入浏览器模式。
- 选择拼接模式（如Spiral），并设置拼接区域（可选择多边形、矩形、圆形等形状）。
- 进行多点对焦：在选定区域内手动（F）或自动（AF）定焦多个点，建议采用"平均单点"策略，并对需要清晰成像的层面进行Z轴定焦。
- 完成设置后，点击"Merge"进行图像拼接
- Z-Stack（Z轴层扫）：
- 用于拍摄类器官、细胞球等具有三维结构的样本。
- 点击"Begin"设定Z轴起点，调节Z轴后点击"End"设定终点，最后点击"Start"开始自动扫描，系统将在Z轴方向上采集一系列图像。
- 明场彩色成像（如用于组化片子）：
- 将右侧相机从单色（如K5）切换为彩色相机（如K5C）。
- 上方光源选择TL-BF（透射光明场）。
- 关闭自动对比度功能。
- Image Size可选择5MP，Live imaging可选2.2MP。
- 曝光时间仍建议在20ms以内，可调节Intensity（强度） 和Aperture（孔径） （通常调至最大）来控制亮度。
- 白平衡校准：在样品空白区域点击进行白平衡。若组织存在阴影，可使用Link Shading模式进行校准。
- 光路设置：将右侧杆子推入（用于荧光），左侧杆子拔出（用于明场）。
拍摄、保存与关机
- 拍摄：
- 拍摄顺序：先拍摄最亮的荧光通道，以减少荧光串色和淬灭的影响。
- 拍摄模式："Single"模式只拍摄一张当前视野；"Start"模式开始按预设方案（如多点位、大图拼接、Z-stack）采集所有图像。
- 数据保存：
- 图像数据一般保存到E盘，请建立个人文件夹并规范命名保存。
- 重要：仪器通常只临时保存数据（如3个月），请务必及时将数据备份至个人存储设备或服务器。可通过局域网上传数据